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腦聲常談:動物模型構建與評估︱動物譫妄模型建立與評估

譫妄模型:
手術/麻醉方式和動物分組:小鼠隨機分為譫妄組(POD組)和對照組(CON組),每組8只。POD組小鼠異氟烷麻醉下行剖腹探查法。小鼠在丙烯酸室中接受1.4%異氟醚誘導15min,然后將小鼠頭部置于維持面罩中接受1.4%異氟烷和100%氧氣,之后進行簡單的剖腹探查術,從劍突、恥骨聯合上方0.5cm做一正中線切口,暴露腹部臟器2min,5?0vicry/thread逐層縫合,手術時間持續約10min,術畢放回麻醉室共麻醉2h,從麻醉中恢復后,正常提供水和食物。術后每8h給予1次奧布卡因軟膏涂抹傷口,直至所有實驗結束。術后行為學出現異常改變小鼠定義為POD小鼠。CON組小鼠在POD組小鼠麻醉/手術時間段內,置于類似的丙烯酸室中2h,接受100%氧氣,但不進行麻醉/手術操作。
曠場實驗(open field test,OFT)

- 曠場實驗,型號:XR-XZ301,上海欣軟 -
曠場實驗裝置67cm×67cm×67cm,攝像機位于裝置上方2m處,將小鼠放于九宮格分區的中央區域,開啟VisuTrack軟件采集系統,記錄2min,測試結束后,70%酒精清潔裝置,更換手套。整理實驗數據,統計分析。
Y迷宮實驗

- Y迷宮,型號:XR-XY1032,上海欣軟 -
通過Y迷宮實驗評估小鼠的空間識別記憶能力,Y迷宮迷路分辨測試。Y迷宮的3個臂分別為起始臂(S臂)、新異臂(N臂)和其他臂(O臂)。首先進入訓練期,擋住N臂,小鼠由S臂放入,在S臂和O臂中自由活動10min。1h后進入檢測期,即打開N臂,由S臂放入,在3個臂中自由活動5min,采用視頻監測分析系統記錄小鼠在各臂的停留時間和總穿梭次數,計算N臂停留時間比率。
食物埋藏實驗(buried food test,BFT)
每次測試前禁食8h并在測試前1h將小鼠置于測試箱中,測試箱中鋪3cm厚墊料,隨機在0.5cm深處放置一片甜味谷物,測試從將小鼠放于籠子中央開始,記錄小鼠揭開食物并用前爪/牙齒抓咬所用的時間,即小鼠找到食物的潛伏期。若5min內未找到,記錄潛伏期為300s。測試完畢后70%酒精清潔測試箱,更換手套。兩組小鼠均在造模前3d進行3次BFT適應,每次間隔24h,將第3次結果作為基線值,基線值潛伏期仍為300s的小鼠被認為嗅覺或注意力異常,不納入后續實驗。通過埋藏食物實驗檢測小鼠的注意力、有組織的思維以及意識水平。
小鼠神經認知功能檢測方法
分別于術前及術后第1、3、7天采用Morris水迷宮實驗評估小鼠空間學習和記憶能力(代表小鼠神經認知功能)。水迷宮分為NE、NW、SE、SW四個象限,水池溫度控制在22~24℃。該實驗分訓練階段和實驗階段。訓練階段記錄小鼠找到平臺所花費的時間(逃避潛伏期)。實驗階段記錄術前及術后第1、3、7天四個象限的小鼠逃避潛伏期,并取平均值。術后第7天測算完各組小鼠逃避潛伏期后,撤去平臺,選擇平臺對面象限及任一象限釋放小鼠,各象限限時60s,觀察并記錄小鼠在目標象限平臺區域穿越次數,即為平臺穿越次數。
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