疼痛和抑郁兩者相互調(diào)控、交互敏化，形成抑郁疼痛共病。模擬伴發(fā)軀體疼痛的抑郁癥患者，采用慢性束縛應(yīng)激(chronic restraint stress，CRS)模型，通過行為學(xué)檢測(cè)來確定小鼠產(chǎn)生抑郁樣行為后是否也會(huì)出現(xiàn)痛覺敏化。建立成熟的抑郁疼痛共病模型對(duì)未來研究相關(guān)機(jī)制非常必要。

CRS實(shí)驗(yàn)步驟：

CRS模型C57BL/6J小鼠隨機(jī)分為CRS組和假手術(shù)(Sham)組。CRS組小鼠用異氟烷麻醉，放入打好小孔的50mL離心管中，擰緊后蓋，確保小鼠無法逃離。將其放回原鼠籠內(nèi)，每日束縛6h后恢復(fù)食水。Sham組小鼠在相同時(shí)間內(nèi)去除小鼠食水，但小鼠可在原鼠籠中自由活動(dòng)，6h后恢復(fù)食水，連續(xù)造模21、28、35d后進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)。

懸尾實(shí)驗(yàn)(tail suspension test，TST)

實(shí)驗(yàn)前1h將小鼠放入行為室適應(yīng)，提前調(diào)節(jié)好行為室光照強(qiáng)度、懸尾裝置及錄像設(shè)備。實(shí)驗(yàn)時(shí)將小鼠尾巴末端用膠帶固定使其懸掛，小鼠頭部距裝置底部20cm，錄制視頻6min，確保錄制環(huán)境安靜。每只小鼠測(cè)試完后用乙醇清潔裝置底部，去除上只小鼠殘留氣味，待乙醇完全揮發(fā)后，開始錄制下一只小鼠視頻。

小鼠懸尾實(shí)驗(yàn)箱，上海欣軟

曠場(chǎng)試驗(yàn)(open field test，OFT)

實(shí)驗(yàn)前1h將小鼠放入行為室適應(yīng)，提前調(diào)節(jié)好曠場(chǎng)錄制光照強(qiáng)度、錄像設(shè)備，清潔曠場(chǎng)底部。曠場(chǎng)裝置為50cm×50cm×40cm無蓋箱體，實(shí)驗(yàn)開始時(shí)將小鼠輕輕放入箱內(nèi)底面中央?yún)^(qū)，拉好四周圍簾，同時(shí)進(jìn)行錄像和計(jì)時(shí)(10min)，保持錄制期間處于安靜環(huán)境。在兩次測(cè)試之間，用乙醇徹底清潔箱體內(nèi)壁和底部，去除上只小鼠殘留氣味，待乙醇完全揮發(fā)后，測(cè)試下一只小鼠。曠場(chǎng)測(cè)試完畢后，使用軟件進(jìn)行視頻分析，主要測(cè)量參數(shù)為小鼠在曠場(chǎng)中央?yún)^(qū)活動(dòng)的距離和時(shí)間及活動(dòng)總距離和時(shí)間。

大小鼠曠場(chǎng)實(shí)驗(yàn)箱，型號(hào)：XR-XZ301

高架十字迷宮實(shí)驗(yàn)(elevated plus maze，EPM)

實(shí)驗(yàn)前1h將小鼠放入行為室適應(yīng)，提前調(diào)節(jié)好高架錄制光照強(qiáng)度、錄像設(shè)備，清潔高架十字臂。高架裝置是由一個(gè)中央?yún)^(qū)和兩個(gè)相互垂直的開臂和兩個(gè)閉臂組成的迷宮。實(shí)驗(yàn)開始時(shí)將小鼠輕輕放置在中央?yún)^(qū)，確保小鼠頭部朝向開臂，拉好四周圍簾，同時(shí)進(jìn)行錄像和計(jì)時(shí)(5min)，保持測(cè)試一直處于安靜環(huán)境。在兩次測(cè)試之間，用乙醇徹底清潔高架十字臂內(nèi)部，去除上只小鼠殘留氣味，待乙醇完全揮發(fā)后，測(cè)試下一只小鼠。高架測(cè)試完畢后，使用軟件進(jìn)行視頻分析，主要測(cè)量參數(shù)為小鼠在開臂活動(dòng)的距離和時(shí)間及活動(dòng)的總距離和時(shí)間。

Fig1 CRS模型后行為分析

機(jī)械痛與熱痛閾值檢測(cè)

將待測(cè)小鼠于實(shí)驗(yàn)前0.5～1.0h放置于金屬網(wǎng)格(0.3cm×0.3cm)上方有機(jī)玻璃盒中適應(yīng)，待小鼠適應(yīng)盒內(nèi)環(huán)境并保持相對(duì)安靜后用vonFrey纖維絲測(cè)定小鼠后足中央?yún)^(qū)。vonFrey纖維絲是由一組從小到大排列的強(qiáng)度不同的纖維絲構(gòu)成。本次實(shí)驗(yàn)從最小值0.008g開始檢測(cè)，測(cè)試過程保持用力均勻，纖維絲呈彎曲狀態(tài)，保持至少1s時(shí)間。觀察小鼠是否出現(xiàn)縮足、舔足及抬足反應(yīng)，如果有則標(biāo)記為陽性，重復(fù)測(cè)定5～10次，每次間隔時(shí)間為3～5min。將陽性反應(yīng)率為50%對(duì)應(yīng)的克數(shù)作為疼痛反應(yīng)閾值。熱輻射閾值檢測(cè)前0.5～1.0h將小鼠放置于30℃恒溫玻璃板上的有機(jī)玻璃盒中適應(yīng)。采用Hargreaves熱敏測(cè)試箱進(jìn)行熱痛閾的檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)前設(shè)定好燈泡熱輻射強(qiáng)度和照射時(shí)間(≤20s)。待小鼠處于安靜狀態(tài)后，用燈泡產(chǎn)生的熱輻射刺激小鼠足底中央皮膚，刺激的同時(shí)開始計(jì)時(shí)，直至小鼠出現(xiàn)縮足、舔足及抬足反應(yīng)后停止照射，計(jì)為縮足反應(yīng)時(shí)間。重復(fù)測(cè)定3～5次，每次間隔5min。求出縮足反應(yīng)時(shí)間的平均值來表示小鼠足底皮膚熱痛閾值。

新奇抑制攝食實(shí)驗(yàn)（Novelty suspended feeding test，NSFT）

小鼠禁食24h（飲水不限），測(cè)試開始前將小鼠置于新的環(huán)境中適應(yīng)30min（與小鼠飼養(yǎng)環(huán)境及其他測(cè)試環(huán)境均不同）。在125×125×40cm測(cè)試箱內(nèi)鋪設(shè)約1cm厚干凈墊料，在測(cè)試箱中間位置放置5粒飼料在一張濾紙（直徑10cm）上。測(cè)試時(shí)將小鼠面向箱壁放入，記錄小鼠5min內(nèi)第1次攝食的潛伏期（攝食被定義為小鼠開始咀嚼食物，而不是簡(jiǎn)單地嗅或觸摸食物）。5min內(nèi)未進(jìn)食者攝食潛伏期記錄為5min。

糖水偏好實(shí)驗(yàn)(sucrose preference test, SPT)

用于檢測(cè)小鼠的快感是否缺失,糖水偏好百分比下降表明小鼠出現(xiàn)抑郁狀態(tài)。小鼠適應(yīng)性飲用 2%糖水48 h,然后用純水交換，12 h 后交換兩瓶的位置，避免小鼠產(chǎn)生位置偏好,記錄24 h內(nèi)小鼠主動(dòng)攝取糖水和純水的量。糖水偏好百分比(sucrose preference)% =糖水消耗量/ (糖水消耗量+純水消耗量)×100%。

糖水偏好測(cè)試儀，上海欣軟