疼痛和抑郁兩者相互調控、交互敏化，形成抑郁疼痛共病。模擬伴發軀體疼痛的抑郁癥患者，采用慢性束縛應激(chronic restraint stress，CRS)模型，通過行為學檢測來確定小鼠產生抑郁樣行為后是否也會出現痛覺敏化。建立成熟的抑郁疼痛共病模型對未來研究相關機制非常必要。

CRS實驗步驟：

CRS模型C57BL/6J小鼠隨機分為CRS組和假手術(Sham)組。CRS組小鼠用異氟烷麻醉，放入打好小孔的50mL離心管中，擰緊后蓋，確保小鼠無法逃離。將其放回原鼠籠內，每日束縛6h后恢復食水。Sham組小鼠在相同時間內去除小鼠食水，但小鼠可在原鼠籠中自由活動，6h后恢復食水，連續造模21、28、35d后進行行為學檢測。

懸尾實驗(tail suspension test，TST)

實驗前1h將小鼠放入行為室適應，提前調節好行為室光照強度、懸尾裝置及錄像設備。實驗時將小鼠尾巴末端用膠帶固定使其懸掛，小鼠頭部距裝置底部20cm，錄制視頻6min，確保錄制環境安靜。每只小鼠測試完后用乙醇清潔裝置底部，去除上只小鼠殘留氣味，待乙醇完全揮發后，開始錄制下一只小鼠視頻。

小鼠懸尾實驗箱，上海欣軟

曠場試驗(open field test，OFT)

實驗前1h將小鼠放入行為室適應，提前調節好曠場錄制光照強度、錄像設備，清潔曠場底部。曠場裝置為50cm×50cm×40cm無蓋箱體，實驗開始時將小鼠輕輕放入箱內底面中央區，拉好四周圍簾，同時進行錄像和計時(10min)，保持錄制期間處于安靜環境。在兩次測試之間，用乙醇徹底清潔箱體內壁和底部，去除上只小鼠殘留氣味，待乙醇完全揮發后，測試下一只小鼠。曠場測試完畢后，使用軟件進行視頻分析，主要測量參數為小鼠在曠場中央區活動的距離和時間及活動總距離和時間。

大小鼠曠場實驗箱，型號：XR-XZ301

高架十字迷宮實驗(elevated plus maze，EPM)

實驗前1h將小鼠放入行為室適應，提前調節好高架錄制光照強度、錄像設備，清潔高架十字臂。高架裝置是由一個中央區和兩個相互垂直的開臂和兩個閉臂組成的迷宮。實驗開始時將小鼠輕輕放置在中央區，確保小鼠頭部朝向開臂，拉好四周圍簾，同時進行錄像和計時(5min)，保持測試一直處于安靜環境。在兩次測試之間，用乙醇徹底清潔高架十字臂內部，去除上只小鼠殘留氣味，待乙醇完全揮發后，測試下一只小鼠。高架測試完畢后，使用軟件進行視頻分析，主要測量參數為小鼠在開臂活動的距離和時間及活動的總距離和時間。

Fig1 CRS模型后行為分析

機械痛與熱痛閾值檢測

將待測小鼠于實驗前0.5～1.0h放置于金屬網格(0.3cm×0.3cm)上方有機玻璃盒中適應，待小鼠適應盒內環境并保持相對安靜后用vonFrey纖維絲測定小鼠后足中央區。vonFrey纖維絲是由一組從小到大排列的強度不同的纖維絲構成。本次實驗從最小值0.008g開始檢測，測試過程保持用力均勻，纖維絲呈彎曲狀態，保持至少1s時間。觀察小鼠是否出現縮足、舔足及抬足反應，如果有則標記為陽性，重復測定5～10次，每次間隔時間為3～5min。將陽性反應率為50%對應的克數作為疼痛反應閾值。熱輻射閾值檢測前0.5～1.0h將小鼠放置于30℃恒溫玻璃板上的有機玻璃盒中適應。采用Hargreaves熱敏測試箱進行熱痛閾的檢測，實驗前設定好燈泡熱輻射強度和照射時間(≤20s)。待小鼠處于安靜狀態后，用燈泡產生的熱輻射刺激小鼠足底中央皮膚，刺激的同時開始計時，直至小鼠出現縮足、舔足及抬足反應后停止照射，計為縮足反應時間。重復測定3～5次，每次間隔5min。求出縮足反應時間的平均值來表示小鼠足底皮膚熱痛閾值。

新奇抑制攝食實驗（Novelty suspended feeding test，NSFT）

小鼠禁食24h（飲水不限），測試開始前將小鼠置于新的環境中適應30min（與小鼠飼養環境及其他測試環境均不同）。在125×125×40cm測試箱內鋪設約1cm厚干凈墊料，在測試箱中間位置放置5粒飼料在一張濾紙（直徑10cm）上。測試時將小鼠面向箱壁放入，記錄小鼠5min內第1次攝食的潛伏期（攝食被定義為小鼠開始咀嚼食物，而不是簡單地嗅或觸摸食物）。5min內未進食者攝食潛伏期記錄為5min。

糖水偏好實驗(sucrose preference test, SPT)

用于檢測小鼠的快感是否缺失,糖水偏好百分比下降表明小鼠出現抑郁狀態。小鼠適應性飲用 2%糖水48 h,然后用純水交換，12 h 后交換兩瓶的位置，避免小鼠產生位置偏好,記錄24 h內小鼠主動攝取糖水和純水的量。糖水偏好百分比(sucrose preference)% =糖水消耗量/ (糖水消耗量+純水消耗量)×100%。

糖水偏好測試儀，上海欣軟