?通過轉(zhuǎn)基因TCR工程來重新定向T細(xì)胞特異性，可以為實(shí)體癌患者提供一種廣泛適用的、腫瘤特異性的、個性化的T細(xì)胞療法。用neoTCR替代內(nèi)源性TCR導(dǎo)致T細(xì)胞僅對由特定人類白細(xì)胞抗原（HLA）呈遞的突變起反應(yīng)，為T細(xì)胞工程提供了安全的靶標(biāo)并將其重新定向到癌細(xì)胞。

免疫療法已成為重要的癌癥治療手段，不同于直接靶向腫瘤細(xì)胞，免疫療法主要是通過患者自身產(chǎn)生強(qiáng)力的免疫反應(yīng)識別與殺傷癌細(xì)胞。癌癥免疫療法最有前途的領(lǐng)域之一就是過繼性免疫細(xì)胞療法（Adoptive Cell Transfer Therapy，ACT），即將患者自己的免疫細(xì)胞（殺傷性T細(xì)胞）進(jìn)行基因工程改造，表達(dá)一種可以特異性檢測和殺死腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞受體（TCR）。

11月10日，《自然》（Nature）雜志在線刊登了美國加州大學(xué)洛杉磯分校(University of California，Los Angeles) 安東尼·里巴斯（Antoni Ribas）和美國制藥公司PACT Pharma阿拉蒂·拉奧（Arati V. Rao）和斯蒂芬妮·曼德爾（Stefanie J. Mandl）等人題為“Non-viral precision T cell receptor replacement for personalized cell therapy”的論文。

該研究使用基于CRISPR/Cas9非病毒精確基因組編輯的方法，改造了癌癥患者的免疫細(xì)胞，制造出具有更強(qiáng)癌細(xì)胞殺傷力的NeoTCR工程化T細(xì)胞，并進(jìn)行了NeoTCR轉(zhuǎn)基因細(xì)胞產(chǎn)品的首次人體臨床試驗(yàn)。雖然關(guān)于患者反應(yīng)的臨床獲益有限，但這項(xiàng)研究證明了該治療策略的潛在可行性。

T細(xì)胞受體（TCR）提供了T細(xì)胞識別癌細(xì)胞中突變的精細(xì)特異性。研究者使用可溶性預(yù)測新抗原-HLA捕獲試劑的個性化文庫從患者自身的循環(huán)T細(xì)胞中分離和克隆可識別突變新抗原的多個TCR，然后使用一種基于CRISPR/Cas9非病毒精確基因組編輯的臨床級方法，同時敲除兩個內(nèi)源性TCR基因——TCRα（TRAC）和TCRβ（TRBC），在TRAC位點(diǎn)插入新抗原特異性TCR（NeoTCR）的兩條鏈，制造出了NeoTCR工程化T細(xì)胞。

研究團(tuán)隊(duì)進(jìn)行了細(xì)胞劑量遞增的首次人類1期臨床試驗(yàn)（NCT03970382）。16名患有難治性實(shí)體癌的患者接受了最多三種不同的NeoTCR轉(zhuǎn)基因細(xì)胞產(chǎn)品，每種產(chǎn)品都表達(dá)患者特異性的NeoTCR。其中，一名患者患有1級細(xì)胞因子釋放綜合征，一名患者患有3級腦炎。所有患者都出現(xiàn)了預(yù)期的淋巴消耗化療的副作用。5名患者病情穩(wěn)定，另外11名患者的病情繼續(xù)進(jìn)展。研究人員在輸注后的腫瘤活檢中檢測到了neoTCR-轉(zhuǎn)基因T細(xì)胞，并且其頻率高于輸注前的天然TCR。這說明用NeoTCR為ACT產(chǎn)生個性化的T細(xì)胞療法是現(xiàn)實(shí)的。

在細(xì)胞基因治療領(lǐng)域，病毒載體因其突出的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率等優(yōu)勢而成為遞送任務(wù)的主導(dǎo)方式。其中，慢病毒載體（LV）和腺相關(guān)病毒（AAV）是應(yīng)用最廣泛的病毒載體。但是慢病毒載體本身存在向基因組隨機(jī)整合的風(fēng)險，錯誤的整合會導(dǎo)致抑癌基因被破壞，產(chǎn)生癌變。病毒載體還會隨著時間緩慢降解，從而產(chǎn)生癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險。此外，病毒載體的生產(chǎn)成本非常高，基于病毒載體的基因療法是迄今為止最貴的藥物。

研究者指出，他們的研究使用HR模板質(zhì)粒而不是病毒遞送，允許快速和個性化的載體生成，克服了基于病毒載體的方法的耗時冗長和成本昂貴問題。與病毒載體相關(guān)的隨機(jī)整合相比，在T細(xì)胞基因組中的精確靶向整合具有更高的安全性。此外，該方法還具有更強(qiáng)的有效載荷能力。

同時他們也指出，文中所述的臨床試驗(yàn)方法具有局限性。首先，表征每個新抗原的蛋白表達(dá)和新表位呈遞的能力和時間有限。其次，每個患者的NeoTCR有不同的親和力。最后，個性化的NeoTCR分離、克隆、驗(yàn)證需要漫長的時間。

研究者總結(jié)認(rèn)為，通過轉(zhuǎn)基因TCR工程來重新定向T細(xì)胞特異性，可以為實(shí)體癌患者提供一種廣泛適用的、腫瘤特異性的、個性化的T細(xì)胞療法。用neoTCR替代內(nèi)源性TCR導(dǎo)致T細(xì)胞僅對由特定人類白細(xì)胞抗原（HLA）呈遞的突變起反應(yīng)，為T細(xì)胞工程提供了安全的靶標(biāo)并將其重新定向到癌細(xì)胞。他們表示，隨著這種方法的可行性和安全性的證明，可以對NeoTCR改造的T細(xì)胞進(jìn)行進(jìn)一步的基因工程改造，以增加其功能。在不久的將來，非病毒基因編輯方法將能夠結(jié)合額外的基因編輯，改善T細(xì)胞功能，避免T細(xì)胞耗竭，允許T細(xì)胞反復(fù)遇到抗原并繼續(xù)與之反應(yīng)，避免實(shí)體瘤微環(huán)境中的免疫抑制因子，并允許體內(nèi)擴(kuò)增，甚至不需要淋巴消耗調(diào)理化療。