陳光標8月25日20點10分發布微博，再次公布了冰桶挑戰的照片。從照片上看，陳光標曾頭頂冰塊雙眼緊閉，全身浸沒在飄滿冰塊的水桶中，僅露出眼耳鼻。此外，另有一儀表插入水桶中。該微博稱，“標哥今天再次向全社會宣布冰桶挑戰一錘定音到此結束！要跟著標哥玩中國慈善的創新，溫度表現在顯示約零下20度?！?/p>

        澎湃新聞（www.kxwhcb.com）注意到，同8月22日陳光標發布的冰桶挑戰照片比較，陳光標水桶背后的汽車部件配色略有不同。8月22日照片中車廂下方警示條系紅白相間，8月25日照片中的相同部件則是純紅色，或可據此判斷，這是陳光標的又一次冰桶挑戰。

        在陳光標8月25日所發微博評論中，網友們對“零下20度”一說普遍表示疑問，認為水中溫度不應低于0度。

        陳光標8月24日曾向澎湃新聞回憶了挑戰時的過程和體驗，他在零下20攝氏度的冰車里先待了20分鐘，30桶水一桶桶往身上澆，“后來主持人跟我說要再堅持3分鐘就30分鐘了，我自己感覺20分鐘還是有的，桶里的水雖然沒有具體測溫，但整體感覺水溫比較刺骨，我渾身麻木，臉色后來發紫。”

        陳光標告訴澎湃新聞，若是有人愿意捐出一千萬做慈善，他愿意再試冰桶挑戰，“至少保證在冰水里待20分鐘，他們可以指定地點，帶冰塊來，找公證人?！?/p>

        8月24日，新浪微博一位名叫“靠譜的冷眼觀潮”的網友曾站出來叫板，決定對賭陳光標，如他在冰桶中待足30分鐘，且出桶后獨立行走100步，通過機構現場公證，該網友將砸鍋賣鐵給陳光標捐100萬?！叭絷惞鈽瞬唤邮芴魬鹨磺卸济髁耍?00萬捐給我?！痹摼W友在微博上稱。

        上述提出對賭的網友引述專業人士說法稱，一般人體在低溫水域中的生存極限：穿著常服并保持靜止，在海水中的存活時間：0℃以下海水，只能耐受幾分鐘；1℃海水，7分；2℃海水，15分；2.5℃海水，30分；5℃海水，60分；10℃海水，3小時，而能在0℃～4℃冰水混合物中堅持30分鐘的人少數中的少數。